使用HyperSA™ Magbeads超敏链霉亲和素磁珠常见问题

使用HyperSA™ Magbeads超敏链霉亲和素磁珠常见问题

Q:什么情况下使用HyperSA™ Magbeads超敏链霉亲和素磁珠？

A:因样本含内源性生物素、或者所用生物素探针含游离生物素，或者其它原因导致的使用普通链霉亲和素磁珠灵敏度不满意，应换用HyperSA™ Magbeads超敏链霉亲和素磁珠

Q: HyperSA™ Magbeads超敏链霉亲和素磁珠提升灵敏度的原理是什么？

A:零化学损伤、单层高密度标记技术，完全保持链霉亲和素的天然构象，真正达到10¹⁵L/molKa的亲和力

Q:HyperSA™ Magbeads用于提高ADA分析的耐药性时，最高能到多少？

A:取决于药品和抗药抗体的亲和力，耐药性有所不同，最高可达到10毫克/毫升的耐药性

Q:HyperSA™ Magbeads用于化学发光免疫分析时，和普通链霉亲和素磁珠相比灵敏度能提高多少？

A:取决于抗原抗体亲和力的大小不同，灵敏度提高2~5倍。

Q:HyperSA™ Magbeads用于富集抗药抗体时，工作浓度是多少？

A:0.05%~0.2%

Q:如何实现HyperSA™ Magbeads、生物素探针、靶标三者的最佳结合？

A:优化选择结合Buffer的pH和离子强度，一般情况下，较低的pH或离子强度，产生较高的灵敏度，反之带来较低的灵敏度。较高的pH或离子强度产生较低的背景信号，反之带来较高的背景信号

Q: HyperSA™ Magbeads、生物素探针、靶标三者反应的允许pH范围是多少？

A:pH应在5.5~8.5之间

Q:什么缓冲液适合用于将生物素化探针与HyperSA™ Magbeads结合?

A: PB和Tris-HCI缓冲液均可。对于生物素化的核酸分子，推荐用0.01M Tris-HCI (pH 7.5)+1.0 mM EDTA+2 M NaCl

Q: HyperSA™ Magbeads能否直接用于PCR实验中？

A:一般情况下，数十微克量的磁珠不会对PCR反应产生抑制作用。但还是建议通过实验进行确证。

Q:当磁珠表面结合了生物素化的双链DNA时，如何将非生物素化的一条单链从上面解离下来?

A:建议用0.1~0.2M氢氧化钠室温孵育解离。具体步骤如下

1）用50μL1xSSC缓冲液洗涤磁珠。

2）将磁珠重悬于20μL的新鲜配制的0.15 M NaOH溶液中。

3）在室温下孵育8分钟。将磁珠置于磁力架上吸附1-2分钟。将上清液移到另一个管子里，其中含非生物素化单链。

4）向上述非生物素化的单链上清液中加入2.2 μL pH7.5的10xTE，后再加入1.5μL左右的1.25M HAc调pH至中性。

附：1x SSC缓冲液配方：0.15 M NaCl,0.015 M柠檬酸钠，用1M氢氧化钠调节pH至7.0,加超纯水定容至1 L。

Q:如何从HyperSA™ Magbeads上解离生物素化分子?

A:

1. 解离生物素化核酸分子
   将结合了生物素化核酸分子的HyperSA™ Magbeads加磁场，去液体，加入95%的甲酰胺+10mM的EDTA,pH 8.5溶液，于65℃下孵育5分钟。加磁场分离磁珠，回收上清液，其中含有解离下来的核酸分子。
2. 解离生物素化蛋白

将结合了生物素化蛋白的HyperSA™ Magbeads在0.02M pH8.0 0.1%SDS

Tris-HCl缓冲液中煮沸3分钟，加磁场，回收上清液体，其中含生物素

化蛋白。

Q:HyperSA™ Magbeads能否重复使用?

A:对于解离生物素化分子的实验，磁珠不能重复使用。对于DNA-蛋白共沉淀、蛋白纯化、抗原富集等温和条件解离靶标的实验，磁珠可以重复使用2~3次。

Q:如果我要在免疫沉淀实验后将蛋白从HyperSA™ Magbeads洗脱而不洗脱磁珠上结合的生物素化抗体，应当用何种条件?

A:可以使用较为温和的洗脱条件，如3M硫氰酸钠、0.1M甘氨酸 pH 2.5-3.0、0.3M醋酸

Q:降低HyperSA™ Magbeads磁珠沉降速度的最佳pH是多少？

A:这取决于生物素化分子的特性，建议您通过测试来确定