ELISA的高本底决不会再出现了

 

 

一、理想的封闭剂应该具备的特点

   第一，封闭剂的分子量要小于包被蛋白，这样利于填充分子间隙及减小空间位阻。第二，封闭剂本身疏水性不能太强，以降低后续ELISA操作的非特异性吸附。第三，在ELISA体系的buffer条件下，不能与酶标结合物形成离子键，防止提升本底。所以，糖蛋白作为封闭剂是不合适的，因为，在某些ELISA体系下，由于羟基的存在，糖蛋白会带有大量负离子，和样本中的杂抗体或者酶标抗体带的正离子相互吸引，导致本底信号增高。

 二、Outblock验证数据

 

1、  糖基化PD1蛋白包被 板子，检测人血中抗PD1单抗，detection为羊抗人-HRP

简要：抗PD1单抗的PK临床生物分析，包被糖基化的PD1抗原蛋白，detection为羊抗人IgG-HRP，由于人血清中正常IgG的干扰，容易出现低值假阳性，用outblock封闭，高效消除正常IgG的干扰。

 

表三 1%BSA PBST 、superblock 、 outblock数据对比（MRD 1：20）

 

Indicator(A value)	1%BSA PBST	superblock	outblock
Blank	0.678  0.658	0.424  0.404	0.056  0.051
Individual1	0.597  0.602	0.398  0.410	0.049  0.050
Individual2	0.572  0.559	0.410  0.409	0.057  0.050
Individual3	0.489  0.498	0.340  0.328	0.045  0.046
2ng/ml S/blank	0.702  0.699 1.04	0.420  0.438 1.03	0.256  0.269 4.89
4ng/ml S/blank	0.806  0.842 1.23	0.510  0.521 1.24	0.551  0.539 10.11

 

小结：所有操作步骤一致的情况下Outblock信噪比显著高于1%BSA PBST和superblock，明显提升临床生物分析的特异性和灵敏度。

 

2、  糖基化vegf蛋白包被板子，检测人血中抗vegf单抗，detection为羊抗人-HRP

简要：抗VEGF单抗的PK临床生物分析，包被糖基化的VEGF抗原蛋白，detection为羊抗人IgG-HRP，由于人血清中正常IgG的干扰，容易出现低值假阳性，用outblock封闭，消除正常IgG的干扰。

 

表四 抗VEGF单抗临床PK分析，superblock AND outblock数据对比（MRD 1：20）

 

indicator	Superblock	outblock
blank	0.142  0.135	0.054  0.057
Individual1	0.157  0.152	0.042  0.038
Individual2	0.125  0.127	0.039  0.030
Individual3	0.123  0.128	0.033  0.036
Individual4	0.189  0.176	0.051  0.057
2ng/ml S/blank	0.267  0.248 1.86	0.198  0.209 3.66

 

小结：所有操作步骤一致的情况下，Outblock信噪比显著高于super封闭剂。